10.16303/j.cnki.1005-4545.2016.06.10
鸡干扰素刺激基因12(ISG12)的克隆表达及抗病毒活性分析
干扰素刺激基因12(interferon-stimulated gene 12,ISG12)在病毒感染过程中已经被监测到,但是针对其抗病毒活性的研究却很少.本研究的主要目的是体外表达鸡的ISG12基因,以禽流感病毒(avian influenza viru,AIV)1215株为病毒模型,利用细胞培养检测其抗病毒活性.利用RT-PCR方法扩增鸡胚成纤维细胞(CEF)的ISG12基因,经测序分析,该基因序列与GenBank中登录的禽属ISG12基因序列相似性为100%.将该基因亚克隆至pET-32a载体构建重组原核表达质粒p32a-C12;工程菌p32a-C12/BL21经IPTG诱导表达,重组蛋白经Ni2+琼脂糖凝胶柱层析纯化,获得相对分子质量约30 000的目的蛋白.利用ISG12蛋白预处理CEF和鸡外周血淋巴细胞(peripheral bloodlymphocyte,PBL)后感染AIV 1215株,或者将该病毒与ISG12蛋白一起接种CEF细胞和PBL细胞,AIV在CEF中的复制能力与对照组无明显差异,而ISG12蛋白预处理鸡PBL细胞和同时感染AIV 1215株时的病毒含量均比对照低.体外抗病毒活性试验表明,ISG12蛋白能够抑制AIV1215株在PBL细胞中的复制,但在CEF细胞上的作用不明显.
ISG12、基因表达、禽流感病毒、病毒复制
36
S852.65;S852.4(动物医学(兽医学))
国家国际科技合作专项资助项目2014DFA31900;山东省农业科学院科技创新重点资助项目2014CXZ08-1
2016-08-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
938-943