番鸭呼肠孤病毒σNS基因真核表达载体的构建及其在DF-1细胞中的表达

摘要：

为实现番鸭呼肠孤病毒(MDRV) YB株σNS蛋白的真核表达,首先经PCR扩增了σNS基因的完整编码序列(CDS),连接到携带有flag标签的真核表达载体pCI-neo-flag,双酶切鉴定及序列测定表明成功构建了重组表达质粒pCl-flag-σNS,使用ViaFect转染试剂将其转染至DF-1细胞,采用半定量RT-PCR法检测σNS基因的转录水平,Western-blot分析σNS蛋白的表达.RT-PCR结果显示,σNS mRNA水平在转染后0～36 h逐渐递增,48 h时出现下降;Western-blot鉴定结果显示,重组σNS蛋白与flag鼠单克隆抗体和MDRV-σNS兔多克隆抗体均能发生特异性反应;以上结果均表明MDRV-YB σNS基因在DF-1细胞中得到了正确的表达,为后续蛋白功能研究奠定了基础.

关键词：番鸭呼肠孤病毒、σNS、真核表达、蛋白免疫印迹

所属期刊栏目：36

分类号：S852.659(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目U1305212

在线出版日期：2016-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：419-422,484