猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5a蛋白在大肠埃希菌中的表达

摘要：

构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV) HuN4株GP5a蛋白基因的原核表达载体,并将其在宿主菌BL21 (DE3)感受细胞中进行表达.以HP-PRRSV HuN4株GP5a蛋白的基因序列为模板,通过RT-PCR扩增获得GP5a蛋白全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建含有GP5a蛋白基因的重组表达载体pGEX-GP5a;将构建的重组质粒转化宿主菌,经IPTG诱导,表达出目的蛋白;表达蛋白采用Western blot方法检测其反应原性.结果显示,成功克隆出了HP-PRRSV HuN4株GP5a蛋白基因全长.片段序列为156 bp;构建的pGEX-GP5a载体经PCR、双酶切、测序鉴定均正确,转化表达宿主菌后经SDS-PAGE检测目的蛋白以包涵体的形式表达,用包涵体纯化法获得该蛋白;Westernblot检测表达蛋白的反应原性,结果显示表达蛋白具有良好的反应原性.本试验成功构建了含有HP-PRRSV HuN4株GP5a蛋白基因的原核表达载体,成功表达、纯化得到了GP5a蛋白,为进一步研究GP5a蛋白的功能提供材料.

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、GP5a蛋白、原核表达

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分类号：S852.651(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然基金青年科学基金资助项目31402208;河南省教育厅科学技术研究重点项目指导计划资助项目14B230003

在线出版日期：2016-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：384-388