刚地弓形虫丝裂原活化蛋白激酶1基因克隆、表达及抗原性分析

摘要：

克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)丝裂原活化蛋白激酶1(TgMAPK1)基因片段,并分析其抗原性.提取弓形虫GT1株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA.RT-PCR扩增TgMAPK1基因.扩增产物经双酶切后连接入pET28a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(Escherichia Coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序.将测序正确的重组质粒pET28a(+)-TgMAPK1转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.以鼠抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性.RT-PCR扩增产物约为1 599 bp.菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET28a(+)-TgMAPK1构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量约58 000的包涵体重组蛋白.Western blotting分析证实其能被鼠抗弓形虫血清识别.刚地弓形虫GT1株TgMAPK1基因片段可在原核表达系统中表达,且该重组蛋白具有抗原性.

关键词：刚地弓形虫、丝裂原活化蛋白激酶1、基因克隆、原核表达、抗原性

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分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31372430;吉林省科技厅科技攻关资助项目20140204068 NY

在线出版日期：2016-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：265-270