猪繁殖障碍性疫病常见病毒多重PCR诊断方法的建立及初步应用

摘要：

根据GenBank登录的猪细小病毒病(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒病2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲分离株LV(PRRSLV)和美洲分离株VR(PRRSVR)等5种病毒基因序列设计合成5对特异性引物.通过优化反应条件,建立了同时检测5种病毒混合感染的多重PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行检测;并将其应用于临床病料检验.结果显示:多重PCR方法中,当PPV、PRV、PCV2、PRRSVR和PRRSLV引物浓度为1.0、0.5、0.5、1.5、1.5 μmol/L、退火温度为60℃时,扩增效果最佳,其扩增出特异性目的片段分别为142、331、547、705、1 367 bp,最低检测量分别为155、45.2、17.2、14.2、43.6 pg,在不同时间对相同样本重复检验6次,结果一致;对临床收集的125份疑似猪病料样品进行多重PCR技术和单一PCR技术进行对比检测,总符合率在97.9％以上,PPV、PRV、PCV2、PRRSLV和PRRSVR的阳性率分别为31.20％、36.8％、34.4％、1.6％和40.8％,混合感染率分别为16.8％、28.8％、23.2％、1.6％和30.4％.结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好,可检测PPV、PRV、PCV2、PRRSVR和PRRSLV的混合感染.

关键词：猪繁殖障碍性疾病、多重PCR、建立、应用

所属期刊栏目：36

分类号：S852.65;S855(动物医学（兽医学）)

资助基金：辽宁省教育厅科研项目L2014327

在线出版日期：2016-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：5-11