猕猴结核IFN-γ体外释放检测法的建立与初步应用

摘要：

旨在建立猕猴结核IFN-γ体外释放检测法,用于猴结核病的特异性诊断.从猕猴外周血白细胞克隆了猕猴IFN-γ(Macaca mulatta IFN-γ,Mm IFN-γ)基因,在大肠杆菌中表达,获得重组MmIFN γ.利用杂交瘤细胞技术获得12株高效价的单克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测猴IFN γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到62.5 ng/L.用所建立的IFN-γ检测法与进口商品化试剂盒符合率为93.84％,具有很好的一致性(κ-0.779 3).以眼睑皮内变态反应法(皮试法)为标准方法,先用皮试法检测146只猕猴,再用进口商品化的IFN γ检测试剂盒(MABTECHTM)检测猕猴外周血淋巴细胞在牛和禽结核菌素刺激下释放的IFN-γ量,利用ROC曲线确定猕猴结核IFN-γ检测法的临界值为114.5 ng/L,对皮试法的灵敏性为68.18％,特异性为91.94％.同时,本试验检测的猕猴的结核阳性率为17.12％,提示结核病对猕猴群的健康存在重大威胁.本试验建立了猕猴结核IFN γ体外释放检测法,为猕猴结核病检测提供了新型技术手段.

关键词：猕猴、结核、IFN-γ、ELISA、结核菌素皮试检测、单克隆抗体

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分类号：S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划资助项目2013BAD03B01-02;农业科技成果转化资金资助项目2012GB23600628

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1488-1494