表达猪细小病毒VP2蛋白和猪IL-18重组伪狂犬病毒的构建

摘要：

为了获得表达猪细小病毒(PPV)VP2蛋白和细胞因子猪白细胞介素-18(IL-18)的重组猪伪狂犬病毒(PRV).将PPV VP2基因和猪IL-18基因分别插入到PRV转移质粒PG中,得到重组质粒PG18 VP2.利用脂质体转染法将重组转移质粒PG18-VP2与猪PRV弱毒株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,以EGFP荧光标记,通过5轮蚀斑筛选纯化,成功获得表达PPV VP2蛋白和猪IL-18且带EGFP标记的重组伪狂犬病毒IL18-VP2 rPRV.用重组病毒感染ST细胞,12h后在荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光;通过RT-PCR证实感染细胞中含有PPV VP2和猪IL-18 mRNA;Western-blot试验结果显示,重组病毒能表达具有生物活性的PPV VP2蛋白和猪IL-18.重组病毒经连续20次传代后感染细胞仍能发出绿色荧光,PCR检测表明VP2及IL-18基因在重组病毒中能稳定遗传.为进一步研究表达PPV VP2蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病毒的免疫效力奠定了基础.

关键词：猪细小病毒、VP2基因、猪IL-18基因、猪伪狂犬病病毒、重组病毒

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分类号：R392

资助基金：河南省重大科技专项资助项目111100110300;河南省教育厅科学技术研究重点资助项目14B180001

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1422-1428