抗产气荚膜梭菌ε毒素Phage-ScFv库的构建、筛选与鉴定

摘要：

利用本实验室已诱导并纯化后的重组毒素蛋白制成类毒素免疫BALB/c小鼠,提取小鼠脾脏mRNA.通过RT-PCR和SOE-PCR获得由抗体重链可变区(VH)-Linker-轻链可变区(VL)构成的750 bp左右单链抗体(ScFv)基因片段.随后利用噬菌体展示技术成功构建了抗产气荚膜梭茵ε毒素噬菌体单链抗体(Phage-ScFv)库.并通过“吸附-洗脱-扩增”,5轮高效的淘洗筛选系统,最终筛选出特异性强的噬菌体抗体.最后,对强阳性的单链抗体侵染E.coli HB2151进行表达,SDs-PAGE结果显示其相对分子质量为30 000左右,与预期结果一致,并且能以分泌形式表达.本试验为抗产气荚膜梭菌ε毒素中毒治疗及其分子致病机制的研究奠定了基础.

关键词：D型产气荚膜梭菌、ε毒素、单链抗体、噬菌体抗体库、富集筛选

所属期刊栏目：35

分类号：S856.25(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北省自然科学基金资助项目2009000290

在线出版日期：2015-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：406-412