小瓜虫抑动蛋白基因核酸疫苗制备

摘要：

为防治水产养殖动物常见多发的小瓜虫病,本试验选取小瓜虫抑动蛋白基因,人工合成经物种优化后的抑动蛋白基因序列,以pVAX1为载体构建重组质粒,转入大肠杆菌DE3进行克隆表达.大量提取构建的重组质粒,通过肌肉注射免疫鱼体,注射剂量为125 μg/尾,同时设立空载体对照组及空白对照组.首免后第4周进行二次加强免疫,分别于首免后第2、3、4周,二次加强免疫后第1、2、3、4、8、16周,抽样采集各组血液,分离血清,RT-PCR法检测抑动蛋白转录水平,同时检测血清抗体产生情况.二次加强免疫后第2周进行同居感染及人工感染试验,检测免疫保护效果.结果表明,质粒注射入鱼体后,所有抽查血液样本均检测到目的基因的转录;所有抽查免疫鱼血清样本均可以对小瓜虫幼虫产生制动效果,制动时间长达8周,空载体对照组和空白对照组无制动效果;同居感染及人工感染后,核酸疫苗免疫组存活率达到90％以上,而空载体组存活率为20％～40％.空白对照组全部死亡.表明构建的质粒作为核酸疫苗对小瓜虫病有较好的免疫保护效果,可显著降低死亡率.研究结果为小瓜虫核酸疫苗的研发与生产应用奠定了基础.

关键词：重组质粒、核酸疫苗、免疫保护、小瓜虫

所属期刊栏目：34

分类号：Q-958.9(生物资源调查)

资助基金：吉林科技发展计划201205069

在线出版日期：2015-02-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1940-1944