鹅FSH基因原核表达

摘要：

促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)作为调节家禽卵泡发育重要的候选基因,但FSH在生物体内的半衰期非常短,本试验将具有延长基因半衰期作用的CTP序列添加到鹅FSH基因各亚基的C末端进行基因融合,以期获得pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α重组蛋白.设计去除目的基因信号肽和舍有酶切位点的特异性引物,经融合PCR扩增获得了目的基因FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α,通过构建原核表达载体pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,蛋白纯化.结果显示,3个融合蛋白FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α的IPTG最佳诱导时间分别为4、5和5h,最佳诱导浓度分别为0.2、0.8和1.5 mmol/L,且都是以包涵体形式存在,相对分子质量分别为32 000、35 000和46 000,与预期大小一致.结果表明,本试验成功构建了鹅pET-32a-FSHα-CTP、pET-32a-FSHp-CTP和pET-32a-FSHβ-CTP-α的原核表达载体,并对它们的重组蛋白进行了纯化,为开展鹅FSH的基因免疫研究和鹅rFSH生物制剂研发奠定基础.

关键词：鹅、FSH基因、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：34

分类号：S835(家禽)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项基金资助项目CARS-43-3;江苏高校优势学科建设工程资助项目苏政办发[2011]137号

在线出版日期：2014-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1805-1812