环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌的研究
将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条检测技术(lateralflow dipstick,LFD)联合,建立了1种可应用于单核细胞增生李斯特菌快速检测的新方法.针对单核细胞增生李斯特菌的actA基因设计3对引物(其中,上游内引物由生物素标记)和l条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,进行由生物素标记的LAMP扩增反应,并利用LFD对经FITC标记探针杂交的扩增产物完成检测.优化后的LAMP反应条件为65℃反应40 min,从细菌基因组DNA提取到LFD结果判断只需90 min左右,比常规PCR技术缩短近2h.LAMP-LFD可特异性地捡出单核细胞增生李斯特菌,对哈维弧菌等常见孤菌及嗜水气单胞菌等的检测结果为阴性.灵敏性试验表明,LAMP-LFD针对病原纯培养物的检测灵敏度为3.2×101 CFU/mL或0.64 CFU/反应,是LAMP检测的10倍,常规PCR检测的100倍;针对人工污染单核细胞增生李斯特菌的原料奶样品的检测灵敏度为1.6×102 CFU/mL或3.2 CFU/反应.利用本方法可从采集样品中检测到单核细胞增生李斯特菌,检测结果与传统的细菌分离培养方法结果一致.试验表明,本研究建立的LAMP-LFD技术可特异、准确地应用于单核细胞增生李斯特菌检测,而且灵敏度高、操作简单、检测成本低,有望发展成为单核细胞增生李斯特菌快速检测的有效手段.
单核细胞增生李斯特菌、环介导等温扩增技术、横向流动试纸条、特异性、灵敏度
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S852.61(动物医学（兽医学）)
国家高技术研究发展计划863计划资助项目2012AA020101,2012AA092001;宁波大学学科资助项目xk11341
2014-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1615-1621,1633
