霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法的建立与应用

摘要：

采用一种新型的引物设计方法——双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO),以霍乱弧菌mdh 基因为靶序列,建立了霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法,分析了DPO引物退火温度不敏感性、检测灵敏度及特异性,并对检测方法进行了初步应用.灵敏度结果显示,DPO-PCR方法对霍乱弧菌的最低检出限为1.07×102CFU/mL.退火温度不敏感性试验中,与常规PCR引物相比,DPO引物在45～65℃退火温度均能够高效扩增出靶基因片段.特异性结果显示,DPO-PCR方法的特异性比常规PCR方法强,不产生任何非特异性扩增.利用建立的霍乱弧菌DPO-PCR检测方法对采集的550份样本进行检测,检出43份霍乱弧菌阳性样本,经行业标准法(SN/T2425-2010)复检,检测结果相同,表明所建立的DPO-PCR检测方法具有良好的实用性,为霍乱弧菌的快速准确检测提供了新途径.

关键词：霍乱弧菌、mdh基因、DPO-PCR方法

所属期刊栏目：34

分类号：S852.61;R535(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科技计划资助项目2012IK157;2013IK051;质检公益性行业科研专项资助项目201310126

在线出版日期：2014-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1284-1288