Ⅰ型鸭肝炎病毒SYBR-Green实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为建立一种快速、特异的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,根据GenBank已登录的DHV-Ⅰ型疫苗株C80(DQ864514.3)的非编码区基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出230 bp的靶序列,并克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒;将纯化的重组质粒10倍梯度稀释后作为标准阳性模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并建立标准曲线,对其敏感性、特异性和重复性进行评价.结果显示,建立的标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系(R2=0.998 2),产物Tm值为87.2～87.9℃,检测灵敏度为71.5拷贝/μL.对55份疑似病料进行检测,荧光定量检测48份为阳性,而用常规PCR方法只能检出39份阳性,ELISA方法只检出30份阳性.这表明所建立的DHV-Ⅰ的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和重复性良好等优点,可用于临床DHV-Ⅰ感染的快速检测,为DHV的分子诊断、流行病学调查及定量分析奠定了基础.

关键词：Ⅰ型鸭肝炎病毒、SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR、ELISA

所属期刊栏目：34

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目BS2011SW026

在线出版日期：2014-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1248-1252