利用SMART技术构建猪血管内皮细胞酵母双杂交cDNA文库
本研究旨在建立猪血管内皮细胞酵母双杂交cDNA文库,进而为研究猪瘟病毒的基因功能及致病机理提供良好的试验体系.体外培养猪血管内皮细胞,提取细胞总RNA,并用Oligotex mRNA Mini Kit纯化PolyA+ mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA).经CHROMA SPINTM TE-400 Column纯化后的dsDNA与线性化的pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞Y187中,以同源重组的方式在酵母细胞内构建猪血管内皮细胞cDNA文库.结果获得的文库容量在6×106CFU/mL,随机挑选24个克隆进行PCR检测,插入的片段大小集中在400～2 000 bp之间,平均插入长度为1 000 bp左右,文库重组率为100％.本研究为从文库中高通量地筛选出与猪瘟病毒互作的重组子,即寻找与该病毒相互作用的受体蛋白奠定了坚实的基础.
猪血管内皮细胞、cDNA文库、SMART技术
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S852.65(动物医学（兽医学）)
2014-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
865-868
