PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立
为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白抗体的ELISA方法,应用RT-PCR从腹泻仔猪样本中扩增获得了1段PEDV河南流行毒株N基因全长序列,根据对其氨基酸序列的抗原性分析结果,将N基因上2个大的抗原表位区(112～321位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32α,构建pET-32α-N重组质粒并转化至宿主菌BL21 (DE3)中.将重组菌在37℃条件下加入IPTG进行诱导使该蛋白获得了高效表达,表达产物为融合蛋白,相对分子质量约41 300.Western-blot分析表明,所表达的蛋白可与抗PEDV全病毒小鼠阳性血清发生反应.以纯化的重组N蛋白作为包被抗原建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法,抗原最佳包被量0.226 μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,二抗最佳稀释度为1∶2 000,待检血清D450值≥0.28判定为阳性.国内首次用该方法对临床猪血清样本进行了检测,母猪血清PEDV抗体阳性率为84.26％(166/197),仔猪血清阳性率为27.93％(31/111).结果表明,建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好,可用于临床上PEDV抗体水平的监测和PED流行病学调查.
PEDV、N基因、原核表达、免疫原性、间接ELISA、抗体监测
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S852.65(动物医学（兽医学）)
2014-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
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