猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立

摘要：

参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒(PRV) gH基因与猪圆环病毒2型(PCV2) ORF2基因的部分片段.将测序正确的PRV gH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEM-TEasy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证.结果显示,PCV2与PRV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80.8℃和86.7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝/μL和180拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍.结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断.

关键词：猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、SYBR GreenⅠ

所属期刊栏目：34

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省重大科技攻关资助项目111100110300

在线出版日期：2014-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：366-370,378