产气荚膜梭菌菌落多重PCR方法的建立及初步应用

摘要：

根据GenBank中已发布的产气荚膜梭菌α、β、ε、ι毒素基因序列,分别设计并合成针对4种毒素基因的特异引物,通过优化多重PCR反应条件,建立1种简单的产气荚膜梭菌定型菌落多重PCR方法.结果显示:A、B、C、D、E5型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠杆菌、巴氏杆菌和芽孢杆菌则均未能扩增出相应条带;将单个菌落稀释100倍,仍能扩增出相应的目的片段,该方法对B型和E型参考菌株最低检测量分别为2.6×104 cfu/mL、1.2×104 cfu/mL.应用该多重PCR方法从106份样品中检测到30株产气荚膜梭菌且均为A型,其中病死鸡的盲肠内容物分离率为36.5％(19/52),健康鸡群新鲜粪便样品分离率为20.4％ (11/54).本研究建立的多重PCR方法特异性强,敏感度高,重复性好,可以有效进行产气荚膜梭菌的快速检测及5种血清型的鉴别,对产气荚膜梭菌的感染及食品安全问题的研究均具有重要意义.

关键词：产气荚膜梭菌、菌落多重PCR、血清型

所属期刊栏目：33

分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：陕西省科学研究发展计划农业攻关项目2011K01-10;西北农林科技大学博士启动基金资助项目2010BSJJ011;西北农林科技大学“大学生创新性实验计划”资助项目2201110712053

在线出版日期：2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1842-1847