稳定表达鸡ST3Gal Ⅰ的BHK-21细胞株的构建及禽流感病毒的增殖

摘要：

克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达载体pcDNA3.1-EGFP中构建真核表达质粒,转染BHK-21细胞后,通过G418抗性和绿色荧光蛋白标记双重筛选,鉴定1抹表达ST3GalⅠ阳性的单克隆细胞株,绿色荧光丰富.经流式细胞仪检测,BHK-21-ST3Gal Ⅰ细胞株中α-2,3连接型受体丰度较亲代BHK-21细胞显著提高.连续传5代10代后仍能检测到其表达,表明ST3GalⅠ基因在细胞中稳定表达.为了检测BHK-21-ST3GalⅠ细胞对H9亚型流感病毒和HSN1 Re-5病毒的增殖效果,将H9亚型流感病毒和H5N1 Re-5病毒接种BHK-21-ST3Gal Ⅰ细胞和BHK-21细胞,同时设普通胰酶和TPCK-胰酶对照组.接毒72 h后收获细胞液,常规方法测定血凝素(HA)滴度.试验结果表明,BHK-21-ST3Gal Ⅰ细胞中禽流感病毒的HA滴度达到1∶256,显著高于BHK-21细胞组,表明其更适于流感病毒的增殖,具备生产流感病毒疫苗的潜力.

关键词：ST3GalⅠ、重组质粒pcDNA3.1-EGFP-ST3GalⅠ、转染、稳定表达、BHK-21-ST3GalⅠ细胞

所属期刊栏目：33

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：动物疫苗关键生产技术研究与开发资助项目2009BADBAB04-3

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1527-1532