乙型脑炎病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究

摘要：

根据乙型脑炎病毒(JEV)NS3基因保守序列设计并合成一对引物,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测JEV的SYBR Green I荧光定量PCR方法.该方法在1.92×108～1.92×101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中19拷贝/μL的病毒核酸,敏感性是常规RT-PCR方法的10倍;检测时间缩短了50％,该方法不与其它猪源病毒发生交叉反应;在重复性试验中,批间、批内变异系数均小于1.2％.应用本方法对JEV在BHK-21细胞上繁殖滴度进行定量检测,绘制JEV在BHK-21细胞上的一步生长曲线,并与TCID50方法绘制的复制动态曲线进行比较.结果显示,两种方法测定的JEV在BHK-21细胞上的复制动态具有一定的平行关系,对于制备灭活疫苗而言,荧光定量PCR方法更快速和敏感,所测得的抗原含量更精确,有利于企业机动灵活地安排生产.

关键词：乙型脑炎病毒、荧光定量PCR、一步生长曲线、TCID50

所属期刊栏目：33

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省高校科技创新人才支持计划资助项目2011HASTIT009

在线出版日期：2013-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：867-873