ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化

摘要：

根据Genbank提供的猪ADIPOQ基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGPU6/GFP/Neo中U6启动子的下游,转化DH5α菌株,双酶切鉴定正确后进行测序,将构建好的真核表达载体转染前体脂肪细胞,并对条件进行优化.限制性内切酶PstⅠ和BamHⅠ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,测序结果显示插入片断与设计序列完全一致,证明重组质粒构建成功,转入到前体脂肪细胞中,可以看见绿色荧光蛋白表达.当质粒浓度0.6μg,脂质体2000是1.2μL,两者质量/体积比为1∶2时,此时转染效率最高,达到53.9％.成功构建了猪ADIPOQ基因的shRNA真核表达载体,并成功将该质粒转入猪的前体脂肪细胞中去,还对质粒与脂质体2000用量比条件进行了优化,此举能为进一步研究ADI-POQ在猪前体脂肪细胞中的功能奠定了良好的基础.

关键词：ADIPOQ基因、shRNA、真核表达载体、RNAi、前体脂肪细胞

所属期刊栏目：33

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：项目:吉林省重大科技专项资助项目20065019

在线出版日期：2013-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：616-621,626