禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立
对AEV陕西分离株VP1基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化.结果表明,VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为50 000的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被质量浓度3.8 mg/L,37℃2h后4℃过夜,1% BSA 37℃封闭2h,待检血清1∶50稀释37℃孵育0.5h,酶标抗体1:4 000稀释,37℃作用30min,底物37℃显色5 min,临界值为0.360;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与美国IDEXX公司AEV抗体检测试剂盒检测结果符合率为91.9%.该方法可用于临床样品的大批量检测.
禽脑脊髓炎、重组VP1蛋白、ELISA
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S852.657(动物医学(兽医学))
陕西省科技统筹创新工程计划资助项目2011KTDZ02-01;西北农林科技大学博士启动基金资助项目01140401
2013-06-13(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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