猪孤雌胚胎干细胞建系的研究
以猪孤雌激活囊胚为材料,囊胚透明带消化后采用全胚培养,培养液中添加不同培养成分或因子(如FGF2,LIF,2i等),以及选择不同的初始培养液体积来筛选猪胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)建系的优化培养体系。囊胚内细胞团形成的细胞集落采用胰酶消化传代。结果显示:透明带消化后,囊胚贴壁率显著升高(19.4%VS.8.8%)(P〈0.05);初始培养液体积比平常培养液体积(0.30mL/孔,24孔培养板)减半条件下,能显著提高其贴壁率(91.7%VS 20.0%)(P〈0.01),而且获得了可传至7代的类ES细胞系2株,碱性磷酸酶染色成阳性;当用2i因子(CHIR99021和PD03025901)去替代培养液中的FGF2,囊胚贴壁率(29.400VS53.3%)和原代集落形成率(20.0%VS 87.5%)反而显著下降(P〈0.01)。这表明培养液添加了FGF2和LIF(不舍2i因子),用24孔板培养,最初培养体积为0.15mL,透明带消化的培养体系比较适合猪孤雌激活胚的ES细胞建系。
猪、孤雌激活、胚胎干细胞、细胞培养、碱性磷酸酶
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S828(家畜)
国家重点基础研究发展计划973计划2010CB945404;中国博士后科学基金20090450039
2012-07-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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