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奶山羊BLG基因敲除载体的构建

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根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5'端同源臂2 264 bp,包括外显子1,3'端同源臂4 461 bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序.然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5'端和3'端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定.将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性.结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除.为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础.

奶山羊、BLG基因、基因敲除、打靶载体

31

S852.21(动物医学(兽医学))

转基因生物新品种培育重大专项2008ZX08008-004

2011-11-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

858-863

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中国兽医学报

1005-4545

22-1234/R

31

2011,31(6)

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