副猪嗜血杆菌重组P2蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立
根据GenBank中副猪嗜血杆菌(HPS)的P2蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用P2-PCR方法从HB070214株中克隆了1 077 bp的P2蛋白基因.将P2蛋白基因亚克隆到原核表达栽体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-P2,在lPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为60 500的可溶性融合蛋白P2-His;经SDSPAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的30%.将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达92.5%.用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性.利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗HPS P2蛋白抗体的间接ELISA方法(P2-ELISA),并用所建立的P2-ELISA与国外进口的HPS检测试剂盒Synbiocits-ELISA对196份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为93.4%.结果表明,本试验建立的P2-ELISA与SynbiocitsELISA具有同样高的特异性.
HPS、P2蛋白、原核表达、ELISA
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S852.61(动物医学（兽医学）)
教育部博士点基金资助项目20030307012;教育部优秀青年教师重点资助项目104101
2011-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
480-484,520
