禽流感病毒PB2亚单位抗血清的制备

摘要：

采用RT-PCR方法分段扩增PB2基因,将目的基因定向克隆至含His TAG的原核表达载体pET-32a,经序列验证正确后,转化BL21大肠杆菌,诱导表达重组蛋白.靶蛋白经Ni+柱纯化后与弗氏免疫佐剂混合免疫新西兰大耳白兔,获得高效价的抗PB2的抗血清.Western-blot检测结果证实制备的抗血清可与PB2蛋白发生特异性反应.进一步将PB2全长基因准确插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞表达PB2蛋白,通过IFA检测发现,抗血清与细胞表达的PB2蛋白发生反应,出现特异性荧光,经激光共聚焦检测PB2亚单位只在细胞核中出现荧光,说明PB2亚单位单独表达仅限于细胞核内.上述研究为进一步探索PB2亚单位的生物学特性及其结构与功能研究打下基础.

关键词：流感病毒PB2、抗血清、原核表达、真核表达

所属期刊栏目：30

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家"十五"科技攻关资助项目2004BA519A54

在线出版日期：2010-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：717-720