伪狂犬病病毒Fa株gE基因在大肠杆菌中的表达及gE-ELISA鉴别诊断方法的建立

摘要：

试验以pPGE DNA为模板,用1对分别含有EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的伪狂犬病病毒gE基因特异性引物,扩增出约1.7 kb的含完整gE基因的DNA片段;目的片段经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,插入原核表达载体pBV220得到重组表达质粒pBVgE,并转化大肠杆菌DH5α;对温敏诱导表达所获产物进行SDS-PAGE、Western-Blot和琼脂双扩散检测.结果表明,gE糖蛋白得到了高效表达,表达产物约占总蛋白的17%.为了鉴别伪狂犬病疫苗免疫猪和自然感染猪,用表达纯化的gE蛋白为抗原,建立了GE-ELISA方法.选定的反应条件包括GE抗原包被浓度为6.6 mg/L,血清最适稀释度为1∶40.测试结果:与PRV、HCV、PRRSV、JEV、SA215阳性血清呈阴性反应,而与PRV标准阳性血清呈阳性反应.这一结果表明该法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于猪伪狂犬病的临床诊断,尤其疫苗免疫猪和自然感染猪的鉴别.

关键词：伪狂犬病病毒、gE基因、gE-ELISA

所属期刊栏目：27

分类号：Q78;S852.65(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA241341;国家科技攻关计划2002BA514A-16-7

在线出版日期：2007-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：289-291,304