疯牛病和羊痒病Western blotting检测方法的建立

摘要：

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法.对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90 V,分离胶电泳电压为恒压160 V,转印的最佳电压和时间为恒压100 V1.5 h;封闭液为3%BSA时,封闭15 min,封闭效果最好;AH6的最佳稀释度为1∶4 000,4C下孵育过夜,马抗鼠二抗的最佳稀释度1∶1 000,室温下孵育30 min.采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics(R)-CheckWESTERN进口试剂盒的检测结果比较,发现其敏感性为100%,特异性为99.4%,与进口试剂盒(100%,100%)无显著差异,这为国产试剂盒研制提供了条件.

关键词：疯牛病、羊痒病、Western blotting

所属期刊栏目：27

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研项目20020019006;国家自然科学基金30371062;30400325

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：66-69,73