猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的原核表达及PPA-NS1-ELISA的初步建立

摘要：

含有猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的重组质粒pPNS1通过EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切后,回收NS1基因,将其亚克隆进原核表达载体pET30a(+)中,构建了重组表达质粒pET-NS1,转入表达宿主菌BL21中,通过IPTG的诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组NS1蛋白高效表达,以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的26.7%.并确定了NS1蛋白的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导时间为3 h.Western blotting检测表明,表达产物具有良好的免疫原性.重组蛋白经纯化后作为抗原,包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-NS1-ELISA).结果表明,抗原最佳包被质量浓度为31.3 mg/L,血清最佳稀释度为1∶40.阳性标准初步定为:待检血清D490＞0.32,且待检血清D490/阴性血清D490＞2.0.

关键词：猪细小病毒、NS1基因、原核表达、PPA-NS1-ELISA

所属期刊栏目：27

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技攻关项目;四川省应用基础研究计划03JY029-035-2

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：13-16