毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白

摘要：

建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A(Hypodermotin A, HA)的技术,并对表达条件进行了优化筛选.将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上,构建了重组转移质粒pPIC9k-HA.重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选.重组酵母细胞在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,培养3 d后收取上清,用阴离子交换层析柱分离纯化.经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为30 000.Western-blotting表明,该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合.明胶电泳检测显示,该蛋白具有酶活性.单因素改变表达条件的结果表明,甲醇浓度在0.5%～1%、溶氧量在70%以上、诱导2～3 d的情况下表达产量最高,达1 500 mg/L左右.该研究结果对防治牛皮蝇蛆病疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值.

关键词：皮蝇素A、毕赤酵母GS115、表达、优化、质粒pPIC9k

所属期刊栏目：26

分类号：S852.7;Q78(动物医学（兽医学）)

资助基金：欧盟资助项目ICA4 2000-30036

在线出版日期：2006-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：296-299