实时荧光定量PCR检测PrP基因表达标准品质粒和标准曲线的构建

摘要：

对金黄地鼠PrP基因序列进行分析,选择其高度保守区域设计引物,对金黄地鼠各组织提取mRNA,经RTPCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明PrP基因保守区段已经成功克隆.将107～102拷贝/反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,10次重复Ct值平均分别为17.50±0.5、21.38±0.2、25.29±0.7、29.12±0.7、31.34±0.4、33.89±0.1,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.998.对动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,该标准曲线的灵敏度为102拷贝/反应.荧光PCR PrP基因表达检测标准品质粒和标准曲线的建立,为检测PrP基因的组织特异性表达和动物传染性海绵状脑病发生的分子机理奠定了基础.

关键词：实时荧光定量PCR、PrP基因、标准曲线、重组质粒、动物传染性海绵状脑病

所属期刊栏目：25

分类号：S855.99;Q78(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国科学院资助项目30371062;高等学校博士学科点专项科研项目20020019006

在线出版日期：2005-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：611-613