新城疫病毒HN蛋白球状头部在T4噬菌体衣壳表面的展示

摘要：

用RT-PCR扩增新城疫病毒(NDV)hn基因,得到大小约1 700bp的片段,将其克隆至pGEM-T easy载体并测定其核苷酸序列.根据测序结果,另设计1对引物带有EcoR I限制位点,用PCR扩增基因主要功能区即编码HN蛋白球状头部的hngd片段,将其分别克隆至pSOC和pR质粒soc基因3'端,重组质粒pSOC-HNGD转化E.coli BL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达,在SDS-PAGE凝胶上检测到相对分子质量大小约67 000的目的蛋白条带.随后将重组质粒pR-HNGD转化T4宿主菌E2感受态细胞,阳性克隆用溶菌酶缺陷的T4-Z1感染,用不加溶菌酶的SC平板筛选阳性克隆.经PCR鉴定,hngd片段已整合在T4-Z1的基因组中.纯化后的重组噬菌体T4-Zl-HNGD用SDS-PAGE和Western-blot可检测到67 000的特异条带.结果表明,HNGD蛋白成功展示在T4噬菌体衣壳表面,且与NDV抗血清具有良好的反应性.

关键词：新城疫病毒、T4噬菌体、HN蛋白、展示

所属期刊栏目：25

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA245051

在线出版日期：2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：346-349