鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存和体外培养

摘要：

采用Ficoll密度梯度离心,提取第19期(孵化72 h)鸡受精蛋性腺中的原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),用不同的冷冻保护液对PGCs采用提纯后直接冷冻保存和在培养体系Ⅱ中培养24 h后再进行冷冻保存,7 d后复苏,用台盼蓝染色检测其存活率,并用PAS染色对冷冻后的PGCs进行特异性鉴定.复苏后的PGCs在培养体系Ⅱ中培养5 d后,更换为培养体系Ⅰ继续培养,进行体外分化试验.结果如下:分离后直接进行冷冻保存的PGCs复苏后存活率最高为(85.93±1.24)%;复苏后的PGCs在培养体系Ⅱ中培养48 h后进行了PAS染色鉴定,结果PGCs呈PAS阳性(细胞核不着色,细胞质呈红色),表明PGCs的染色特性没有因冷冻保存和体外培养而发生改变;复苏后的PGCs在培养体系Ⅱ中培养可形成细胞克隆,当把PGCs更换到培养体系Ⅰ培养5 d后,PGCs克隆有的仍保持克隆状态,但体积缩小,克隆中细胞排列紧密,颜色较深,有的克隆由鸟巢状变为不规则形,且在克隆周围形成类神经细胞样细胞.而经体外培养后再进行冷冻保存的PGCs,复苏后存活率最高为(42.26±1.36)%.

关键词：鸡、原始生殖细胞、冷冻保存、体外培养

所属期刊栏目：25

分类号：S814.8(普通畜牧学)

资助基金：国家自然科学基金30170678

在线出版日期：2005-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：316-319