10.3969/j.issn.1005-4545.2004.06.017
有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库的构建
利用Stratagene公司HybriZAP-2.1建库试剂盒构建了经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库.采取健康鲤鱼外周血,分离白细胞,经LPS、PHA和ConA分组作用不同时间后,分别提取总RNA,将各组样品混合后,以Oligo(dT)纤维素柱分离纯化mRNA,经逆转录合成cDNA的第1链和第2链,与EcoRI接头连接,酶切后,用CHR0MA SPIN-400柱离心层析纯化,与HybriZAP-2.1载体连接,体外包装后转染E.coli XLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和文库扩增.结果构建的经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库原始库容量为1.67×106pfu,插入片段长度在0.4×103~3.0×103bp,重组率为98.9%,扩增后的文库滴度为6.16×109pfu/mL,该文库符合cDNA文库构建的标准,为克隆和研究鱼类免疫应答相关基因提供了有效的工具.
有丝分裂原、鲤鱼、外周血白细胞、cDNA文库
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S91;Q78(水产基础科学)
国家自然科学基金30200210
2004-12-16(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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568-570