猪丁型冠状病毒截短S蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要：

为建立快速、高效检测猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)的血清学方法,构建了pET-32a-S-S1b重组质粒,通过原核表达获得重组S1b蛋白,以此为包被抗原建立了检测血清中PDCoV IgA抗体的间接ELISA方法,对该检测方法的反应条件进行优化,验证了其特异性、敏感性和重复性等.结果显示:重组S1b蛋白呈包涵体表达,大小为34.7 ku,反应原性良好;建立的间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:250 ng/孔抗原4℃过夜包被,10 g/L BSA 37 ℃封闭2 h,待检血清1∶200稀释37 ℃孵育45 min,二抗1∶10000稀释37 ℃孵育1h,显色时间为10min.测定24份阴性血清,确定临界值为0.388.检测阳性血清敏感度为1∶1 600;批间和批内重复试验的变异系数均小于10％;本方法特异性高,与猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒和猪肠病毒标准血清无交叉反应.选取30份血清,与Western-blot检测结果比较,该间接ELISA的符合率为96.66％.应用该方法对486份临床血清样品进行检测,阳性率为32.72％.本研究中建立的方法为PDCoV的防控提供了技术支持.

关键词：猪丁型冠状病毒、S蛋白S1b、间接ELISA、临床检测

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西重点研发计划项目;大学生创新创业项目;广西自然科学基金项目;广西大学巴马产教融合研究院专项

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：48-55