非洲猪瘟病毒C84L蛋白通过激活NLRP3炎症小体上调炎症因子的表达

摘要：

探索非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)调控细胞因子产生和细胞死亡的机制.利用NLRP3炎症小体表达系统,筛选发现ASFV-C84L蛋白诱导NLRP3炎症小体介导的IL-1β的分泌上调.首先,利用生物信息学分析C84L的结构信息,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)确定C84L蛋白在ASFV感染后的表达时序,细胞内定位;同时,用荧光素酶活性检测和蛋白免疫印迹(West-ern-blot)确定C84L蛋白参与调控p65的磷酸化以及IL-1β的成熟和细胞焦亡;然后,用碘化丙啶(PI)染色观察C84L蛋白诱导细胞的死亡情况;最后,使用qPCR和酶联免疫吸附试验检测C84L蛋白对IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子转录和分泌的影响.结果显示:C84L为亲水性蛋白,与沙门菌效应蛋白SifA具有同源性;ASFV感染原代猪肺泡巨噬细胞4 h后,C84L mRNA表达水平逐渐上调,后续持续表达,第8小时达到顶峰;而且IFA结果显示,C84L蛋白在细胞质和细胞核中均有定位.荧光素酶和Western-blot结果显示,C84L促进p65的磷酸化并激活NF-κB启动子的活化.PI染色结果显示,C84L真核质粒转染细胞后诱导细胞死亡,Western-blot结果也显示C84L诱导Caspase-1成熟以及膜孔蛋白N-GSDMD(GSDMD剪切后的N端片段)剪切.将C84L真核质粒转染细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子转录水平呈剂量依赖性升高;与转录水平相似,C84L表达诱导IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平上调.结论:ASFV C84L蛋白通过激活NF-κB以及NLRP3炎症小体诱导IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎细胞因子表达水平上调以及细胞焦亡的发生.

关键词：非洲猪瘟病毒、细胞因子、C84L、NF-κB、NLRP3

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分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;兰州市科技计划项目;兰州市科技计划项目;甘肃农业大学基金项目;甘肃农业大学基金项目;甘肃农业大学基金项目;甘肃农业大学基金项目;甘肃省科技厅国际合作项目;甘肃省自然科学基金;国家生猪技术创新中心项目;十四五广东省揭榜挂帅项目;中国农业科学院科技创新工程项目

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

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