牛病毒性腹泻病毒一步法微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用

摘要：

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)一步法微滴数字PCR(RT-ddPCR)方法,本研究在一步法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的基础上,设计BVDV的特异性引物和探针,对RT-ddPCR试验中的反转录酶、退火温度、引物和探针浓度以及检测方法的反应条件进行优化.同时对其特异性、敏感性、重复性进行评估.结果显示,建立的RT-ddPCR方法最佳反转录体系为商品化一步法数字PCR试剂盒配套试剂、引物和探针终浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为57℃;用本方法检测常见疫病病毒时结果呈阴性;本方法最低检测限为3.2copies/μL,重复性好,且变异系数小于5％.采用RT-ddPCR和RT-qPCR对24份牛源拭子样品进行检测,检测结果显示所建方法优于RT-qPCR方法.本研究建立的RT-ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样品的核酸检测,为牛病毒性腹泻病毒感染的早期检测和定量诊断提供了技术支持.

关键词：牛病毒性腹泻病毒、一步法、微滴式数字PCR、定量检测

所属期刊栏目：53

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省科技发展计划基金项目;吉林省科技发展计划基金项目;吉林农业科技学院博士科研启动基金项目

在线出版日期：2023-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1-8