蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒羊口疮病毒和山羊痘病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)和山羊痘病毒(CaPV)的方法,基于TaqMan探针技术,分别以NS3、N、F1L和P32为靶基因设计特异性探针和引物.以特异性引物扩增目的基因并构建重组质粒标准品.通过优化反应体系建立多重荧光定量PCR检测方法,并用此方法检测临床样品.结果显示,该多重荧光定量PCR标准曲线呈线性关系,对BTV、PPRV、ORFV和CaPV的扩增效率分别为100％、91％、91％、95％;该方法具有较高的灵敏性和特异性,对BTV、PPRV、ORFV和CaPV阳性质粒的最低检出量分别为17、12、8和9 copies/μL,与口蹄疫病毒、腐败梭菌、布鲁菌及弓形虫无交叉反应;其重复性较好,组间变异系数和组内变异系数均小于5％.对232份样品进行检测,用该多重荧光定量PCR分别检出9份BTV、3份PPRV、3份CaPV和24份ORFV阳性样品,而用常规PCR分别检出7份BTV、3份PPRV、0份CaPV、12份ORFV阳性样品.综上,该方法能够同时检测BTV、PPRV、ORFV和CaPV,可用于羊病的鉴别诊断、流行病学调查和疫病防控.

关键词：蓝舌病病毒、小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒、山羊痘病毒、多重荧光定量PCR

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2017YFD0502306

在线出版日期：2023-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1510-1517