猪细小病毒实时荧光定量LAMP检测方法的建立与初步应用

摘要：

为了建立猪细小病毒(PPV)核酸环介导等温扩增(LAMP)定量检测方法,选择PPV NS1基因序列为靶序列,设计3对特异性引物,通过优化反应体系和反应条件,筛选用于提高反应体系稳定性的化学制剂,建立了一种PPV的实时荧光定量LAMP(qLAMP)检测方法.结果显示,添加Eva Green的反应体系的扩增效果明显好于SYBR GreenⅠ和钙黄绿素;体系中加入的10 g/L聚丙烯酰胺使质粒标准品在1.39×105～1.39×101 copies/μL和Ct值之间的线性关系良好,标准曲线方程为Y=-2.9435X+44.354,相关系数R2为0.9849;该方法不与其他病毒的核酸样品发生交叉反应,检测灵敏度达13.9 copies/μL,变异系数≤1.08％;对200份流产猪胎儿的样品进行检测,阳性率为18％,与实时定量PCR的检测结果一致.本试验中建立的qLAMP检测方法为PPV的临床快速检测提供了新方法.

关键词：猪细小病毒、环介导等温扩增、实时荧光、定量检测

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省生猪产业技术体系项目;青岛农业大学高层次人才启动基金

在线出版日期：2022-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1238-1244