蓝狐兔脑炎微孢子虫夹心ELISA检测方法的建立与应用

摘要：

本试验旨在建立一种可用于大规模检测蓝狐兔脑炎微孢子虫的夹心ELISA方法,使其在疾病早期或隐性感染时,能及早地发现并确诊,从而采取措施.首先,于病料中初步分离兔脑炎微孢子虫,随后通过革兰染色和ITS基因对比验证病原,通过接种犬肾细胞进行纯化.制定免疫方案,将纯化的兔脑炎微孢子虫以1×107 mL-1免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.采用纯化后的多抗作为捕捉抗体,蓝狐IgG作为识别抗体,家兔抗狐IgG-HRP作为指示抗体,通过检测纯化后的微孢子虫建立夹心ELISA.研究表明,多抗最适包被质量浓度为5μg/mL,50g/L脱脂奶粉溶液37℃封闭1h,待测样本孵育时间为2 h(37℃),识别抗体质量浓度为37.5 μg/mL,反应时间为1.5 h(37℃),家兔抗狐IgG-HRP工作浓度为1 ∶5 000,孵育时间为1h(37℃).本研究建立的夹心ELISA对纯化孢子的最低检测浓度为6.25×105mL-1,对人工添加微孢子虫的最低检测灵敏度为1.25×106 mL-1,特异性试验时只在检测添加兔脑炎微孢子虫时为阳性.通过检测辽宁省辽阳市不同养殖场的60份样品,对建立的夹心ELISA进行初步应用,其结果与PCR检测结果的符合率为79.97％.本研究具有一定的可应用性,可为大规模检测蓝狐感染兔脑炎微孢子虫时提供一些技术支持,同时也为兔脑炎微孢子虫的免疫学检测方法的研究提供了理论依据.

关键词：蓝狐、兔脑炎微孢子虫、多克隆抗体、夹心ELISA

所属期刊栏目：52

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省科技厅科技支撑计划重点项目20190301009NY

在线出版日期：2022-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1094-1101