产肠毒素大肠杆菌黏附素基因多重PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立一种能同时快速、灵敏、准确检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的多重PCR检测方法,根据GenBank中ETEC K88(F4)、K99(F5)、987P(F6)、F41和etpA黏附素基因的保守序列设计并合成了 5对特异性引物,通过多重PCR反应条件优化,建立了一种能快速检测5种黏附素基因的多重PCR方法.结果表明,该方法可同时特异性扩增出大肠杆菌K88、K99、987P、F41和etpA基因片段,对鼠伤寒沙门菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、猪巴氏杆菌、猪霍乱沙门菌、单增李斯特菌均无特异性扩增.敏感性试验结果显示,用该多重PCR能检测到K88、K99、etpA、F41和987P基因的最小活菌数分别为1.1×106、1.2×106、6.3×105、1.2×105 和 6.2×104 CFU/mL.K88、K99、987P、etpA 和 F41 的基因组 DNA 的检测下限分别为 1.17×10-3、0.1、1.88×10-3、2.55×10-3和1.0×10-5ng/μL,表明其敏感性较高.人工模拟污染粪便样品试验结果表明,人工污染粪便样品中K88、K99、F41、987P和etpA的检测限分别为2.5×108、2.5×108、2.5×103、1.9×107和1.75×103 CFU/g,进一步验证了非预增菌下该多重PCR方法的临床可行性.并利用所建立的多重PCR方法对80株大肠杆菌临床分离株进行检测,K88的阳性率为12.5％(10/80),K99的阳性率为1.25％(1/80).研究表明:建立的产肠毒素大肠杆菌黏附素基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性,可用于临床上大肠杆菌分离菌株黏附素基因的快速鉴定.

关键词：产肠毒素大肠杆菌、黏附素基因、多重PCR

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分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;上海市自然科学基金;河南科技大学青年骨干教师培训计划项目;河南科技大学省部级科技创新平台培育项目

在线出版日期：2022-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：970-977