禽圆环病毒2型微滴式数字PCR定量检测方法的建立及应用

摘要：

为建立一种可定量检测禽圆环病毒2型(AGV2)的微滴式数字PCR(ddPCR)新型检测方法,根据GenBank中AGV2的VP2基因保守序列设计了特异性探针和引物,优化不同探针引物浓度组合和退火温度梯度,通过使用该方法与荧光定量PCR(qPCR)和普通PCR方法进行灵敏度比较,同时对其他常见禽病病原体进行检测,并对40份棉拭子临床样品进行检测,评估了该方法的特异性、敏感性和重复性.结果显示,该方法最佳引物浓度均为900 nmol/L,最佳探针浓度为500 nmol/L,最佳退火温度为54.0℃;灵敏度低至3.2 copies/μL,是qPCR和普通PCR的10倍和100倍;其他常见禽病病原体检测结果均为阴性;40份临床样品的ddPCR检测结果与qPCR检测结果一致;批内和批间重复性较好,变异系数小.结果表明,本研究所建立的微滴式数字PCR方法具有更高的敏感性和准确性,可成功运用于快速定量检测AGV2感染.

关键词：禽圆环病毒2型、微滴式数字PCR、敏感性、特异性、ddPCR

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西科技基地和人才专项;广西科技重大专项;广西八桂学者专项;国家高层次人才特殊支持计划（国家“万人计划”）

在线出版日期：2022-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：964-969