MAVS-/-细胞系的构建及其影响禽流感病毒复制的研究

摘要：

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究.设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGFP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除细胞系,CCK-8法检测细胞增殖速度;荧光定量PCR方法检测H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染后的TCID50、病毒拷贝数以及IRF3、IFN-β、Mx1基因转录水平变化.结果显示,筛选出1株MAVS基因缺失44bp的MDCK细胞(MAVS-/-MDCK),其增殖速度与正常细胞相比未观察到显著差异;荧光定量PCR结果表明,TCID50、病毒拷贝数差异最高可分别达到MDCK细胞的4.11倍和1.82倍;MAVS-/-MDCK中IRF3、IFN-β和Mx1 mRNA表达水平显著降低,表明MAVS敲除后抑制了 Ⅰ型干扰素信号通路.表明,本研究获得的MAVS-/-MDCK能够促进禽流感病毒的复制,为提高疫苗生产效率和质量提供候选细胞株;该细胞株也为进一步研究MAVS参与抗病毒天然免疫应答奠定基础.

关键词：MAVS、MDCK、CRISPR/Cas9、H9N2亚型禽流感病毒

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;兽医生物技术国家重点实验室自主研究课题

在线出版日期：2022-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：344-350