猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)作为一种新型的猪肠道腹泻病毒,建立快速有效的检测手段十分必要.本研究根据PDCoV N基因中的保守序列设计了 1对特异性引物,PCR扩增后克隆至pEASY-Blunt Zero载体,构建了阳性质粒pEASY-PDCoV/N.以阳性质粒pEASY-PDCoV/N为模板,建立了检测PDCoV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性等进行了优化与验证.结果显示,Ct值与标准模板在5.83×107～5.83×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,线性方程的斜率为-3.323,最低检测限度为5.83×101 copies/μL.该方法特异性和重复性均较好,对PEDV、PRV、TGEV等病毒均未出现检测信号,批内和批间变异系数分别小于1％和2％.利用建立的PDCoV荧光定量PCR检测方法对60份猪腹泻样品进行核酸检测,阳性率为18.3％,比普通PCR检出率高6.7％.结果表明,该方法可适用于临床快速检测PDCoV,为该病的预防和控制提供技术支持.

关键词：猪德尔塔冠状病毒、N基因、荧光定量PCR

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：上海市科技兴农项目;国家重点研发计划

在线出版日期：2022-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：298-303