鹅出血性多瘤病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和在临床检测中的应用进行验证.结果显示,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的标准曲线呈良好的线性关系,其线性相关系数R2=0.975,其扩增效率E=86.731％,熔解曲线呈现单峰;检测鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鹅星状病毒时呈阴性,具有较好的特异性;最低检出浓度为(1.16×101 copies/μL),比普通PCR方法灵敏100倍;其中组内变异系数在0.10％～1.48％之间,组间变异系数在1.07％～2.24％之间,具有较好的重复性和稳定性;对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20％,其中阳性符合率为100％,总符合率为80％.上述结果表明,本研究建立的检测GHPV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,对GHPV的快速诊断和监测具有重要意义.

关键词：鹅出血性多瘤病毒、SYBR Green Ⅰ、荧光定量PCR

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：湖南省教育厅科学研究项目19C0923

在线出版日期：2022-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：278-284