猪急性腹泻综合征冠状病毒膜蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)抗膜蛋白(M)多克隆抗体,本研究以SADS-CoV GDS04分离株cDNA为模板扩增M基因片段,并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组质粒pGEX-6p-1-M.测序正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,所获得的重组蛋白主要以包涵体形式存在,采用切胶纯化方式进行蛋白纯化.纯化后的M蛋白混合弗氏佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,经过4次免疫,获得鼠抗M蛋白的多克隆抗体.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹试验(Western-blot)及间接免疫荧光试验(IFA)验证鼠抗M多克隆抗体的反应原性.ELISA结果显示,抗体效价能达到1∶12800.Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体可以识别重组M蛋白和SADS-CoV感染Huh7细胞表达的M蛋白.IFA结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别SADS-CoV.以上结果表明,重组的M蛋白不仅具有良好的免疫原性,还具有良好的反应性,为后续SADS-CoV诊断方法的建立及M蛋白生物学功能的研究奠定了基础.

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒、M蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：52

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省杰出青年科技人才项目;中国农业科学院科技创新工程项目

在线出版日期：2022-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：62-69