产气荚膜梭菌β1毒素蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

摘要：

为建立产气荚膜梭菌β1毒素抗体间接ELISA检测方法,从C型产气荚膜梭菌扩增出编码β1毒素蛋白的基因,将其克隆至原核表达载体pET30a后,转入表达宿主菌BL21中,用IPTG诱导表达的包涵体蛋白经Ni柱纯化后,用不同浓度的尿素溶液进行复性处理.用不同浓度的重组蛋白包被酶标板,控制变量法对ELISA各步反应条件和血清、酶标二抗的稀释度进行优化.结果表明,纯化后的重组蛋白的纯度可达93％,且具有较好的反应原性,重组蛋白的最适包被浓度为1 μg/mL、4℃过夜包被,山羊血清按照1∶300稀释,37℃C反应15 min,家兔抗山羊酶标抗体按照1∶50 000稀释,37℃反应60 min时效果最好.对30份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定其临界判定值,即D450≥0.335 7为阳性,D450＜0.335 7为阴性;并用相应的血清检验了该方法的敏感性、特异性和重复性.用此方法检测西北地区部分羊场的500份血清样品,其中有473份β1毒素抗体呈阳性,检出率为87.4％.此方法的建立为产气荚膜梭菌β1毒素抗体检测试剂盒的研发奠定了基础.

关键词：产气荚膜梭菌;β1毒素蛋白;ELISA

所属期刊栏目：51

分类号：S852.616.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目;国家现代农业产业技术体系项目

在线出版日期：2021-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1207-1214