H1亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测H1抗原方法的建立

摘要：

用禽流感病毒(AIV) A/Chicken/Guangxi/90C/2011 (H1N2)毒株制备单克隆抗体(McAb)并建立夹心ELISA检测H1亚型AIV.AIV 90C/2011 (H1N2)毒株经纯化灭活后免疫BALB/c小鼠,取第5次免疫3d后的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合.用4U的H1抗原经血凝抑制试验(HI)筛选效价高的杂交瘤细胞株并经3次亚克隆,最终获得抗体分泌高且稳定的杂交瘤细胞株.分泌的抗体经H1 HI、Western-blot和间接免疫荧光检测进行验证,并用于建立夹心ELISA方法检测H1 AIV.经融合细胞筛选,获得4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用其中一株7B9制备单克隆抗体,分泌抗体效价达1∶512,其抗体类型经鉴定为IgG1.用制备的单抗建立夹心ELISA方法检测H1 AIV,测定其阴阳判定值为0.2714.特异性试验显示,检测的H1 AIV毒株D450值均大于0.2714,对照的其他AIV毒株以及新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒毒株的D450值均小于0.2714.敏感性测试最低能检测出10-5稀释的HA效价的H1 AIV.本试验建立的基于McAb的H1 AIV夹心ELISA检测方法特异性好,敏感.

关键词：H1亚型禽流感病毒;单克隆抗体;夹心ELISA;检测

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分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西科技重大专项;广西科技基地和人才专项;中央引导地方专项;国家"万人计划"领军人才专项;"广西八桂学者"专项

在线出版日期：2021-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1106-1112