塞内卡病毒A VP2蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立与应用

摘要：

为加强塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的鉴别诊断及流行病学监测.本研究以SVA重组VP2蛋白及其对应的辣根过氧化酶(HRP)标记的单克隆抗体,建立了检测SVA抗体的阻断ELBA方法.该方法优化后,抗原最佳包被浓度为0.25 μg/mL,37℃孵育2h后4℃过夜;最佳封闭液为1％ BSA,37℃孵育lh;待检血清最佳稀释度为1∶1,37℃孵育1.5h;酶标单抗最佳稀释度为1∶1000,37℃作用45 min;TMB最佳显色时间为37℃作用10～15 min.本方法的判定标准:当阻断率(PI)≥41.25％时为阳性,PI≤25.29％时为阴性,25.29％＜PI＜ 41.25％时为可疑.该方法与FMDV、PRV、PRRSV、CSFV和PCV2等参考阳性血清均无交叉反应性.批内和批间重复性试验结果显示,变异系数均小于11％.与中和试验的符合率为70.1％.对506份临床猪血清样品的检测结果显示,SVA抗体阳性率达74.5％.综上所述,本研究建立的阻断ELBA方法具有良好的特异性与稳定性,可用于检测血清中的SVA抗体.

关键词：塞内卡病毒A;VP2蛋白;单克隆抗体;阻断ELISA

所属期刊栏目：51

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家生猪现代产业体系建设专项CARS-36

在线出版日期：2021-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1097-1105