牛病毒性腹泻病毒Erns84-170aa蛋白的可溶性表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

为建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的ELISA方法,对Erns蛋白一个包含2个预测抗原表位的96氨基酸蛋白编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体pET-Erns84-170aa,转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组蛋白表达.将重组Erns4-17aa蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-blot分析其抗原性.结果 显示,重组Erns84-170aa蛋白以完全可溶形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni2+-NTA树脂纯化获得重组Ernss84-170a蛋白的浓度和纯度分别为1.5 mg/mL和94％.Western-blot显示,该重组蛋白对BVDV阳性血清具有很强的抗原反应性.用纯化的重组Erns84-170aa蛋白建立间接ELISA方法(Erns84-170aa-iELISA)的结果显示,所建立方法的最佳抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶100,酶标二抗的稀释度为1∶5 000,血清D450的阴阳性临界值为0.283;该方法仅对BVDV阳性血清呈特异性反应,对1∶1 280倍稀释的阳性血清仍可检出,批内试验和批间试验的变异系数均小于10％.用该方法对487份牛血清进行BVDV抗体检测,检出128份阳性血清.本研究建立的Erns84-170a-iELISA方法为BVDV抗体检测及流行病学调查提供了一种有效手段.

关键词：牛病毒性腹泻病毒、Erns、可溶性表达、间接ELISA、抗体检测

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：质检公益性行业科研专项;科技计划

在线出版日期：2020-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1229-1235