多房棘球蚴主要卵抗原p40-1的原核表达、多克隆抗体制备及其组织定位

摘要：

初步确定MEAp40-1的基因特征及其组织分布特征.根据WormBase数据库中多房棘球蚴MEAp40-1序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增MEAp40-1编码基因并构建重组表达质粒pET-28a-MEAp40-1,IPTG诱导表达并用His-Ni亲和层析柱纯化,制备多克隆抗体.通过间接ELISA方法检测多克隆抗体效价,应用免疫荧光技术定位MEAp40-1在原头蚴中的分布.通过生物信息学分析发现,多房棘球绦虫表达3种不同的MEAp40(MEAp40-1～3),分别分布在不同染色体上.系统进化树显示,每个多房棘球绦虫MEAp40基因与其相应的细粒棘球绦虫的同源基因组成一支.多房棘球绦虫MEAp40-1编码基因全长945 bp,编码314个氨基酸.7种绦虫的MEAp40-1蛋白很保守,均存在α晶体结构域,并且位于该结构域中的协同分子伴侣结合位点也非常保守.MEAp40-1重组蛋白大小约为37 ku,其多克隆抗体效价可达1∶409 600,可识别虫体中的MEAp40-1天然蛋白.MEAp40-1蛋白主要分布在多房棘球蚴后端,而头节、囊壁等其他部位均未见表达.结合以上研究结果,推测MEAp40-1蛋白在绦虫中的生物学功能保守,可能与多房棘球绦虫原头蚴的发育有关.

关键词：多房棘球蚴、MEAp40-1基因、原核表达、多克隆抗体、免疫荧光

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分类号：S852.734(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2020-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：982-988